Идентификация микроскопических грибов в чистых культурах и клинических пробах по жирным кислотам и стеринам методом газовой хроматографии — масс-спектрометрии.

Осипов Г.А.¹, Арзуманян В.Г.², Гребенюк В.Н.³, Поздоровкина В.В.¹, Парфенов А.И.⁴, Ручкина И.Н.⁴, Бажин Ю.А.⁵, Парфенов Г.И.⁶, Мазитова Л.П.³, Текучева Л.В.^3
1Научный центр сердечно-сосудистой хирургии им. Бакулева, Академическая группа академика РАМН Ю.Ф.Исакова
²НИИ вакцин и сывороток им. Мечникова
³Центральный научно-исследовательский кожно-венерологический институт им. Короленко
⁴Центральный НИИ гастроэнтерологии
⁵Центр здоровья семьи, г. Калининград
⁶Частный медицинский салон терапевтической косметологии «Благовест», г. Москва
 
Второй Всероссийский Конгресс по Медицинской Микологии, Москва 24-25 марта 2004 г.,
Тезисы опубликованы в 3 томе сборника «Успехи медицинской микологии».
 

Исследованы химические компоненты клеток некоторых клинически значимых микроскопических грибов с целью их идентификации как в чистой культуре так и в клиническом материале пациентов с разной патологией без предварительного выделения чистых культур. При сопоставлении профилей клеточных жирных кислот грибов разных таксонов были выявлены существенные различия в их химическом составе и показана его информативность и специфичность на уровне рода. Для дрожжеподобных грибов Candida albicans маркерами являются гептадеценовая и лигноцериновая кислоты, для рода Mucor — ейкозановая кислота, для актиномицетов — разветвленные изо-гексадекановая (Streptomyces, Nocardiopsis), 10-метил-гексадекановая (Rhodococcus) кислоты и туберкулостеариновая — для Nocardia.  Специфичность идентификации грибов повышена введением в анализ новых соединений, таких как оксикислоты, спирты и стерины. Длинноцепочечные 2-оксикислоты С24 -С26, не характерные для других микроорганизмов, были обнаружены у представителей родов Mucor, Aspergillus, Candida, Malassezia. У большинства исследованных штаммов обнаружены разнообразные стерины: эргостерол, ситостерол, брасикастерол, эргостатриен, ланостадиенол, и другие вместе с их  предшественником — скваленом. Использование указанных выше веществ в качестве маркеров позволило отследить присутствие соответствующих микроскопических грибов и аэробных актиномицетов в клинических объектах: коже, биоптатах кишечника, фекалиях, крови, мокроте, моче, ликворе, вагинальном содержимом, эякуляте, ликворе, раневом отделяемом. Исследовано микробное сообщество очага поражения кожи больных с атопическим дерматитом, псориазом, угревой болезнью и алопецией. ГХ-МС анализ методом прямого сканирования и масс-фрагментографии показал наличие в основном грибковых компонентов по сравнению с бактериальными. Обнаружены маркеры C.albicans, Aspergillus, Malassezia и других грибов, бактерий родов Clostridium, Peptostreptococcus, Propionibacterium, Klebsiella, Flavobacterium, Bacteroides  а также стафилококков и микобактерий. Анализ кожного сала — себума — показал наличие оксикислот С24-С26 и стеринов как у здоровых людей, так и у больных алопецией и акне.  Из биоптатов тонкого кишечника людей с синдромом раздраженного кишечника (СРК) выделены в чистой культуре дрожжеподобные грибы Candida, микроскопические грибы Penicillum freg, аэробные актиномицеты Nocardiopsis dassonviley. Показано, что при СРК, наряду с изменением бактериальной составляющей микробиоты происходит сушественное увеличение численности грибов кандида и уменьшается концентрация нокардий, родококков и актиномадура. При антибиотико-ассоциированной диаррее (ААД) и алопеции в тонком кишечнике, а при простатите в эякуляте увеличивается содержание микроскопических грибов, продуцирующих ситостерол и кампестерол (нитчатые грибы с дрожжевым запахом, выделены в чистой культуре). Из аэробных актиномицетов в 100% случаев ААД по маркерам отмечено превышение численности псевдонокардий. Подавляющее большинство недиагностируемых форм инфекционного простатита связано с увеличением на порядок и более концентрации 10-метил-гексадекановой (10Ме16) кислоты  — маркера Rhodococcus equi. При атопическом дерматите, напротив, численность родококков по данным контроля  концентрации 10Ме16 в крови уменьшается при увеличении содержания маркеров других аэробных актиномицетов: нокардий, стрептомицетов, а также микроскопических грибов, продуцирующих кампестерол. Приведенные примеры показывают новые возможности детектирования и мониторинга клинически значимых микроскопических грибов и аэробных актиномицетов при заболеваниях инфекционной этиологии и дисбактериозах слизистых оболочек кишечника и других органов. Тому способствует экспрессность метода ГХ-МС микробных молекулярных маркеров, универсальность, селективность и высокая чувствительность в детектировании и количественном определении возбудителей различной природы: бактерий, вирусов, грибов и актиномицетов.