МИКРОБНЫЙ ПЕЙЗАЖ ОПЕРИРОВАННЫХ БОЛЬНЫХ С ОГРАНИЧЕННЫМ СТЕРИЛЬНЫМ ПАНКРЕОНЕКРОЗОМ В РАЗЛИЧНЫЕ ПЕРИОДЫ КОМПЛЕКСНОГО ЛЕЧЕНИЯ

Для изучения микробного пейзажа больных с панкреонекрозом предложен метод газовой хроматографии масс- спектрометрии. Обследовано 14 больных с ограниченным стерильным панкреонекрозом, которым выполнены операции, и в сравнительном контексте обследованы 18 здоровых людей. У больных с панкреонекрозом определяли концентрацию микроорганизмов в сыворотке крови при поступлении, в середине лечения и при выписке.
Ключевые слова: стерильный панкреонекроз, газовая хроматография – масс-спектрометрии
ВВЕДЕНИЕ
Существующие на сегодняшний день стандартные методы диагностики панкреатогенной инфекции запаздывают в реальном режиме требования, когда жизненно важным становится вопрос о хирургическом лечении больных с панкреонекрозом [5]. Общеизвестно, что показанием к лапаротомной операции является наличие инфекции в поджелудочной железе и забрюшинном пространстве [1]. Также необходимы лабораторные критерии, позволяющие ежедневно коррегировать эффективность комплексного лечения больных с панкреатогенной деструкцией [2, 6, 8]. Все вышеперечисленное послужило побудительной при- чиной для исследования.
ЦЕЛЬ РАБОТЫ
Определить эффективность метода газовой хроматографии масс-спектрометрии в динамике комплексного лечения больных с ограниченным стерильным панкреонекрозом.
 
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
Метиловые эфиры жирных кислот и триметилсилильные эфиры исследовались методом ГХ-МС
на газовом хроматографе Agilent Packard HP 6890 с квадрупольным масс-спектрометром HP MSD 5973N в качестве детектора [4]. Для хроматографирования использовали колонку HP-5MS с внутренним диаметром 0,25 мкм. Процентный состав смеси вычислялся по площади газохроматографических пиков [3]. Качественный анализ основан на сравнении времен удерживания и полных масс-спектров соответствующих чистых соединений с использованием библиотеки данных NIST08.L и стандартных смесей (Bacterial Acid Methyl Esters (CP Mix, Supelco, Bellefonte, PA, USA)), а также по количеству введенного стандарта (дейтерометиловый эфир тридекановой кислоты) [5, 7].
Определен микробный пейзаж 14 больных c ограниченным стерильным панкреонекрозом и в сравнительном контексте – 18 условно здоровых людей.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Динамика изменений концентрации микроорганизмов у оперированных больных с ограниченным стерильным панкреонекрозом представлена в таблице 1.
 
Таблица 1 Микробный пейзаж больных с ограниченным стерильным панкреонекрозом (оперированные)
в различные периоды лечения (n = 14)
 

 
Примечание. 2, 3, 4 – значимость различий (р < 0,05) между сроками лечения и определения ГХ-МС больных с ограниченным стерильным панкреонекрозом.
Нами установлено увеличение микробной флоры выше нормы, имеющее тенденцию к повышению у больных с ограниченным стерильным ПН, которым было выполнено хирургическое вмешательство: Clostridium ramosum, Fusobacterium / Haemophylus, Helicobacter pylori h18.
Отмечено снижение микроорганизмов от высоких до нормальных показателей: Peptostreptococcus anaerobius, Streptomyces, Rhodococcus, Staphylococcus intermedius, Cl. difficile, Staphylococcus, цитомегаловирус, Actinomyces viscosus.
Также выявлено, что концентрация следующих микроорганизмов имела тенденцию к снижению, однако, тем не менее, не достигла нормальных показателей: Eubacterium lentum (группа А), Moraxella
/ Acinetobacter, Pseudomonas aeruginosa, Campylobacter mucosalis, Eubacterium moniliforme, E. nodatum,

1. sabureum, Clostridium perfringens, Streptococcus mutants (анаэробные), Herpes, Nocardia asteroides, Ruminicoccus, E. lentum 7741 (группа В).

Отмечена тенденция к уменьшению количества микроорганизмов в конце лечения, не превышавших нормальные показатели при госпитализации в следующих случаях: Streptococcus (оральные), Bacillus cereus, Актиномицеты, Corineform CDC-group XX, Propionibacterium spp. (P. freudenreichii), Actinomycetes 10Me14.
Выявлена недостаточность Bifidobacterium к концу лечения, что создает дисбиоз кишечника.
Таким образом, примененный метод газовой хроматографии масс-спектрометрии является перспективным методом диагностики микроорганизмов больных с острым панкреатитом, позволяет коррегировать результаты комплексного лечения этих больных и требует дальнейших исследований в этой области.
ЛИТЕРАТУРА
Верховцева Н.В., Осипов Г.А. Свойства и трофические связи основных групп микроорганизмов отделов кишечника и фекалий по данным измерений микробных маркеров методом ГХ-МС // Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы. – М., 2004. – С. 20–21.
Verkhovtseva NV, Osipov GA (2004). Properties and trophic connections of main groups of microorganisms of intestine parts and feces according to the data of detecting of microbial markers using GC-MS [Svojstva i troficheskie svjazi osnovnyh grupp mikroorganizmov otdelov kishechnika i fekalij po dannym izmerenij mikrobnyh markerov metodom GH-MS]. Probiotiki, prebiotiki, sinbiotiki i funkcional’nye produkty pitanija. Sovremennoe sostojanie i perspektivy, 20-21.
Гельфанд Б.Р., Филимонов М.И., Бурневич С.З. Деструктивный панкреатит, доказательные методы диагностики и лечения. – М., 2010. – 12 с.
Gelfand BR, Filimonov MI, Burnevich SZ (2010). Destructive pancreatitis, evidence-based methods of diagnostics and treatment [Destruktivnyj pankreatit, dokazatel’nye metody diagnostiki i lechenija], 12.
Крымцева Т.А., Осипов Г.А., Бойко Н.Б., Соколов Я.А. и др. Минорные жирные кислоты биологических жидкостей урогенитальных органов и их значимость в диагностике воспалительных процессов // Журн. микроб. эпидем. иммун. – 2003. –№ 2. – С. 92–101.
Krymtseva TA, Osipov GA, Boyko NB, Sokolov YA et al. (2003). Minor fatty acids of biological fluids of urogenital organs and their significance in the diagnostics of inflam- matory processes [Minornye zhirnye kisloty biologicheskih zhidkostej urogenital’nyh organov i ih znachimost’ v diagnostike vospalitel’nyh processov]. Zhurn. mikrob. jepidem. immun., 2, 92-101.
Полеско И.В., Бутов Ю.С., Осипов Г.А., Кабаева Т.И. и др. Состав кожного сала, микроэкология кожи и кишечника у больных себорейным дерматитом и акне (исследование методом газовой хроматографии масс-спектрометрии) // Рос. журн. кож. и вен. бол. – 2007. – № 2. – С. 43–50.
Polesko IV, Butov YS, Osipov GA, Kabaeva TI et al. (2007). Composition of sebum, skin and intestine microecology in patients with seborrheic dermatitis and acne (research using gas chromatography mass-spectrometry) [Sostav kozhnogo sala, mikrojekologija kozhi i kishechnika u bol’nyh seborejnym dermatitom i akne (issledovanie metodom gazovoj hromatografii mass-spektrometrii)]. Ros. zhurn. kozh. i ven. bol., 2, 43-50.
Савельев В.С. Хирургические инфекции кожи и мягких тканей // Российские национальные реко- мендации. – М., 2009. – С. 24–27.
Saveljev VS (2009). Surgical infections of skin and soft tissues [Hirurgicheskie infekcii kozhi i mjagkih tkanej]. Rossijskie nacional’nye rekomendacii, 24-27.
Хабиб О.Н., Белобородова Н.В., Осипов Г.А. Детектирование молекулярных маркеров бактерий в ткани клапанов сердца в норме и при патологии с применением метода газовой хроматографии и масс- спектрометрии // Журн. микроб. эпидем. иммун. – 2004. – Т. 7, № 3. – С. 62–65.
Habib ON, Beloborodova NV, Osipova GA (2004). Detection of molecular markers of bacteria in the cardiac valve tissue in normal and pathological condition using gas chromatography mass-spectrometry [Detektirovanie molekuljarnyh markerov bakterij v tkani klapanov serdca v norme i pri patologii s primeneniem metoda gazovoj hromatografii i mass-spektrometrii]. Zhurn. mikrob. jepidem. immune., 7 (3), 62-65.
Brandtzaeg P, Bryn K, Kierulf P et al. (1992). Meningococcal endotoxin in lethal septic shock plasma studied by gas chromatography, mass-spectrometry, ultracentrifugation and electron microscopy. J. Clin. Investig., 89, 816-823.
McNeil MM, Brown JM, Jarvis WR, Ajello L (1990). Comparison of species distribution and antimicrobial susceptibility of aerobic actinomycetes from clinical specimens. Rev. Infect. Dis., 12 (5), 778-783.
Stead DE, Sellwood JE, Wilson J et al. (1992). Evaluation of a commercial microbial identification system based on fatty acid profiles for rapid, accurate identification of plant pathogenic bacteria. J. Appl. Bacteriol., 72, 315-321.
 
Сведения об авторах Information about the authors
 
Дамбаев Георгий Цыренович – член-корр. РАН, заведующий кафедрой госпитальной хирургии Сибирского государ- ственного медицинского университета
Dambaev Georgy Tsyrenovich – Corresponding Member of RAS, Head of the Department of Hospital Surgery of Siberian State Medical University
Саганов Владислав Павлович – доктор медицинских наук, заведующий кафедрой госпитальной хирургии Бурятского государственного университета (670042, г. Улан-Удэ, пр. Строителей, 1; тел.: 8 (3012) 55-62-58; e-mail: uromed-lkc@mail.ru) Saganov Vladislav Pavlovich – Doctor of Medical Sciences, Head of the Department of Hospital Surgery of Buryat State University (pr. Stroiteley, 1, Ulan-Ude, Russia, 670042; tel.: +7 (3012) 55-62-58; e-mail: uromed-lkc@mail.ru)
Раднаева Лариса Доржиевна – доктор химических наук, профессор, заведующая кафедрой фармации Бурятского государственного университета, заведующая лабораторией химии природных систем Байкальского института природопользования СО РАН
Radnaeva Larisa Dorzhievna – Doctor of Chemical Sciences, Head of Department of Pharmacy of Buryat State University, Head of the Laboratory of Chemistry of Natural Systems of Baikal Institute of Nature Management SB RAS
Хитрихеев Владимир Евгеньевич – доктор медицинских наук, профессор, директор медицинского института Бурятского государственного университета
Khitrikheev Vladimir Yevgenyevich – Doctor of Medical Sciences, Professor, Director of Medical Institute of Buryat State University
Цыбиков Еши Нянюевич – доктор медицинских наук, профессор кафедры госпитальной хирургии медицинского института Бурятского государственного университета
Tsybikov Eshi Nyanyuevich – Doctor of Medical Sciences, Professor of the Department of Hospital Surgery of Medical Institute of Buryat State University
Авторы: Г.Ц. Дамбаев , В.П. Саганов , Л.Д. Раднаева, В.Е. Хитрихеев , Е.Н. Цыбиков.// Бюллетень ВСНЦ СО РАМН 2015, 12(102)